Lateral Flow Antibodies
Lateral-Flow-Tests sind immunchromatographische Schnelltests im Streifenformat. Sie ermöglichen den Nachweis verschiedener Analyten innerhalb weniger Minuten. Neben den schnellen Ergebnissen und der einfachen Anwendung sind die Vorteile von Lateral-Flow-Tests die geringen Kosten und die hohe Validität. Da sie ohne komplexe Infrastruktur durchgeführt werden können, sind sie als Point-of-Care-Tests (POCT) vielseitig einsetzbar.
antibodies-online bietet eine große Auswahl an hochwertigen Antikörpern, die sich für den Einsatz in Lateral-Flow-Assays eignen. Entdecken Sie unsere Antikörperpaare, die für Lateral-Flow-Anwendungen geeignet sind, in der untenstehenden Tabelle!
Lateral Flow Antikörper-Paare
| Capture Antibody | ABIN | Klonalität | Detection Antibody | ABIN |
|---|
- Was ist ein Lateral Flow Test?
- Wie funktioniert ein Lateral Flow Immunoassay?
- Wie sieht der Prozess der Assay-Entwicklung aus?
- Antikörper für die Entwicklung von Lateral Flow Assays
- Reporterpartikel für LFA-Assays
- Kontrolllinien in LFA-Tests
- Was sind die Anwendungsbereiche für Lateral Flow Assays?
- Wichtige Ziele bei der Entwicklung von Lateral Flow Assays
- Referenzen
Was ist ein Lateral Flow Test?
Lateral Flow Assays bieten eine einfache und schnelle Möglichkeit, eine flüssige Patientenprobe, wie z. B. Blut, Urin, Serum, Speichel, Schweiß oder andere Flüssigkeiten, auf einen bestimmten Analyten zu testen. Der erste Lateral-Flow-Test, der auf den Markt kam, war der Clearblue 1-Schritt-Test im Jahr 1988 als Heimtest für den Nachweis des Schwangerschaftshormons. In den letzten Jahren wurde die Technologie mit großem Erfolg für den Nachweis von Infektionskrankheiten, insbesondere SARS-CoV-2, eingesetzt.
Prinzip des Lateral Flow Assay: Die Testlinie besteht aus einem Antikörper, der spezifisch für ein Protein oder Molekül von Interesse ist. Die Probe, bei der es sich um einen biologischen Extrakt handeln kann, wird auf das Probenpad aufgetragen. Das lösliche Material migriert durch das Konjugatpad und setzt dabei die Nachweis- und Kontrollkomponenten frei. Konjugierte Antikörper, die das Antigen binden, bilden einen konjugierten Antikörper/Antigen-Komplex. Während der Komplex weiterwandert, fängt der auf der Testlinie beschichtete Antikörper den Komplex über ein alternatives Epitop auf dem Antigen ein, und der markierte Antikörper erzeugt ein nachweisbares Signal. Ungebundene Materialien wandern seitlich über die Kontrolllinie und schließlich in das absorbierende Kissen.
Wie funktioniert ein Lateral Flow Immunoassay?
Lateral-Flow-Tests sind eine weitere Variante des ELISA, bei der Antigene auf einem Zellulosestreifen oder einer anderen geeigneten Matrix immobilisiert werden. Die Probe wird an einem Ende des Streifens aufgetragen, und die vorhandenen Antikörper diffundieren entlang des Streifens, bis sie die Stelle erreichen, an der das entsprechende Antigen immobilisiert ist. Die für das Antigen spezifischen Antikörper binden an das Antigen, verbleiben dort und werden mit einem markierten Nachweisantikörper sichtbar gemacht.
Wie sieht der Prozess der Assay-Entwicklung aus?
Die Entwicklung eines Lateral-Flow-Tests (LF) umfasst in der Regel mehrere wichtige Schritte. Zunächst ist die Auswahl geeigneter Antikörper oder anderer Bindungsmoleküle von entscheidender Bedeutung, da sie die Spezifität des Assays bestimmen. Anschließend werden diese Biomoleküle mit Markern wie kolloidalen Goldnanopartikeln oder fluoreszierenden Molekülen konjugiert, um eine visuelle oder gerätegestützte Detektion zu ermöglichen. Die Assay-Komponenten, einschließlich der konjugierten Biomoleküle, des Probenpads, des Konjugatpads, der Membran und des absorbierenden Pads, werden auf einer Nitrocellulosemembran zusammengefügt. Schließlich werden die Testparameter wie Probenvolumen, Durchflussrate und Reaktionszeit optimiert, um einen zuverlässigen und empfindlichen Nachweis des Zielanalyten zu gewährleisten.
Antikörperauswahl für LFA-Assays
Die Auswahl des geeigneten Antikörperpaares ist ein wichtiger Schritt bei der Entwicklung eines LFA. Das Antigen muss mit hoher Spezifität und Empfindlichkeit in einer oft heterogenen Probe nachgewiesen werden. Monoklonale Antikörper, die aus einer einzigen B-Zelle gewonnen werden, weisen eine hohe Spezifität für ein bestimmtes Epitop auf dem Zielmolekül und eine geringe Kreuzreaktivität auf. Um die geringere Sensitivität zu kompensieren, wenn ein mAb anstelle eines Polysaccharids für das Capture verwendet wird, können mehrere mAbs in einem Assay kombiniert werden. Durch das Einfangen verschiedener Epitope kann die Spezifität erhöht werden. Ein weiterer Vorteil von mAb ist ihre unbegrenzte Verfügbarkeit und die Möglichkeit, die Antikörper ohne Änderungen zwischen verschiedenen Chargen zu reproduzieren. Sie sind auch besser für die Konjugation geeignet.
Polyklonale Antikörper haben oft den Vorteil, dass sie billiger sind und eine höhere Affinität für das Antigen haben, weil sie verschiedene Epitope erkennen. Dies ermöglicht auch die Erkennung von Unterschieden im Antigen, z. B. verschiedene Spezies, Varianten oder modifizierte Proteine. Es kann aber auch zu einer höheren Kreuzreaktivität führen, was für eine Familie von Zielen oder deren Metaboliten wünschenswert sein kann. Der Nachteil von pAbs sind die Schwankungen von Charge zu Charge, da die Immunantwort von Tier zu Tier und von Blutung zu Blutung variieren kann. Die Versorgung mit einem polyklonalen Antikörper kann nicht ein Leben lang garantiert werden. Der Antikörper muss außerdem sehr stabil sein, um den verschiedenen Bedingungen standzuhalten, denen er während der Herstellung und Lagerung der LFA ausgesetzt ist.
antibodies-online bietet ein breites Spektrum an qualitativ hochwertigen Antikörpern für den Einsatz in Lateral Flow Assays. Der Schwerpunkt unseres Portfolios liegt auf Antikörpern gegen Substanzen aus dem menschlichen Körper sowie gegen verschiedene Viren. Darüber hinaus bieten wir auch Antikörper gegen Pilze und Bakterien an. Entdecken Sie unser komplettes Portfolio weiter unten oder nutzen Sie die Tabelle der Antikörperpaare für Lateral Flow oben.
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Reporterpartikel für LFA-Assays
Die am häufigsten für visuelle Tests verwendete Markierung sind Goldnanopartikel. Für Lateral-Flow-Tests können Partikel unterschiedlicher Größe und Form verwendet werden. Größere Partikel können zu einem stärkeren Signal führen und damit die Empfindlichkeit erhöhen, während sie gleichzeitig weniger wahrscheinlich die Membran durchdringen. Partikel mit einer Größe zwischen 20 nm und 500 nm sind daher optimal geeignet. Die Goldoberfläche hat eine natürliche Affinität für Antikörper und andere Proteine, was die Herstellung von Konjugaten erleichtert.
Die herkömmliche Methode zur Bindung von Proteinen an kolloidales Gold ist die allgemein verwendete passive Adsorption. Durch die Nutzung verschiedener Kräfte zwischen Molekülen und Oberflächen bei einem bestimmten pH-Wert (z. B. van der Waals und ionische Kräfte) binden Antikörper spontan an die Oberfläche von Goldnanopartikeln. Um eine vollständige Beladung der Partikel zu gewährleisten, wird der Antikörper in der Regel im Überschuss zugegeben. Dies hat den Nachteil, dass mehr Antikörper benötigt werden, um die Konjugate herzustellen
Eine Alternative bietet die kovalente Bindung der Antikörper an die Oberfläche. Carboxyl-funktionalisierte Nanopartikel sind die empfohlene Wahl für die Herstellung kovalenter Verbindungen. Mithilfe der Carbodiimid-Aktivierungschemie (EDC/Sulfo-NHS) können Antikörper dauerhaft an die Oberfläche von kolloidalem Gold gebunden werden, das mit Carboxylgruppen modifiziert wurde. Auf dieser Oberfläche werden mit EDC und Sulfo-NHS reaktive Einheiten eingesetzt, um Amidbindungen zu schaffen, die die Carbonsäure auf dem Nanopartikel mit den primären Aminen in den Lysinresten des Antikörpers oder Proteins verbinden. Ein IgG-Antikörper enthält in der Regel 80-100 Lysinreste, von denen etwa 30-40 für eine EDC/NHS-Bindung zugänglich sind. Die Vorteile gegenüber der passiven Bindung sind stabilere Konjugate, auch unter rauen Bedingungen. Die Konjugate sind leichter zu reproduzieren und es werden weniger Antikörper benötigt. Die kovalente Bindungschemie ermöglicht auch eine bessere Kontrolle des Verhältnisses von Antikörper zu Partikel, was ebenfalls wichtig ist, um die Empfindlichkeit von kompetitiven Assays zu optimieren. antibodies-online ist in der Lage, Sie bei der Entwicklung von Lateral Flow Assays zu unterstützen. Das Gold-in-a-Box™ Conjugation Kit ermöglicht eine optimale Bindung eines Antikörpers/Proteins an unsere hochkonzentrierten Naked Gold 20 nm und 40 nm Goldsole, wobei ein hohes Maß an spezifischer Aktivität erhalten bleibt, indem der pH-Wert der Goldsole leicht über dem isoelektrischen Punkt des beschichteten Antikörpers/Proteins eingestellt wird.
Gold Antikörper Labeling Kits
Kontrolllinien für LFA-Assays
Auch im Kontrollfenster im Sandwich-Format (C) muss unabhängig vom Ergebnis des Testfensters (T) eine Reaktion bzw. das Vorhandensein des Analyten nachgewiesen werden, um einen reibungslosen Ablauf und die korrekte Durchführung des Tests zu gewährleisten. Der auf dem Pad gebundene Kontrollantikörper sollte gegen die Spezies gerichtet sein, von der der primäre Antikörper stammt. Dieser sekundäre Antikörper bindet den konjugierten primären Antikörper, was zu einem sichtbaren Signal in der Kontrolllinie führt. Wenn Ihr konjugierter Primärantikörper von der Maus stammt, muss der Sekundärantikörper gegen die Maus gerichtet sein, z. B. ein Kaninchen-Anti-Maus-Antikörper. Lateral-Flow-Tests können sowohl qualitativ als auch quantitativ verwendet werden. Dazu wird die Bandenintensität des Analyten mit einem optischen Lesegerät ausgewertet.
Kontrollen für LFA-Assays
Was sind die Anwendungsbereiche für Lateral Flow Assays?
Lateral-Flow-Tests sind in vielen Industriezweigen für Point-of-Care-Tests weit verbreitet, z. B. in der Pharmazie, bei Umwelttests, in der Tiergesundheit, bei Lebensmittel- und Futtermitteltests sowie in der Pflanzen- und Erntegesundheit. Da sie unabhängig von der Ausrüstung von Fachleuten, geschulten Anwendern oder sogar Patienten durchgeführt werden können, sind Lateral-Flow-Immunoassays in der medizinischen Diagnostik von besonderem Wert. Lateral-Flow-Tests sind die am häufigsten verwendeten diagnostischen Schnelltests, d. h. schnell und einfach durchzuführende medizinische Diagnosetests, mit denen sich das Vorhandensein oder Nichtvorhandensein eines Zielanalyten, z. B. von Krankheitserregern oder Biomarkern, bei Menschen oder Tieren nachweisen lässt. Der Zweck definiert die Art des Tests, der verwendet wird:
Sandwich Assay
Das Sandwich-Format wird häufig in Lateral Flow Assays verwendet, wenn ein spezifischer Zielanalyt, z. B. ein Protein oder ein Biomolekül, in einer Probe nachgewiesen werden soll und mindestens zwei Epitope für die Bindung verfügbar sind. Dieses Format ist besonders nützlich, wenn Sie über einen Antikörper oder ein anderes Erkennungsmolekül (den Fänger-Antikörper) verfügen, der/das spezifisch an den Zielanalyten binden kann. Das Sandwich-Format ist für Lateral Flow Assays vorteilhaft, da es eine hohe Spezifität bietet und den Nachweis spezifischer Zielanalyten selbst in komplexen Proben ermöglicht. Ein Antikörper ist an der Testlinie und dem zweiten Antikörper immobilisiert, und ein zweiter Antikörper ist mit dem Nanopartikel konjugiert. Die resultierende Signalintensität ist proportional zur Menge des nachgewiesenen Analyten in einer Probe.
Kompetitiver Assay
Ein kompetitives Format in Lateral Flow Assays wird verwendet, wenn man das Vorhandensein oder die Konzentration eines kleinen Zielanalyten in einer Probe nachweisen möchte. Für Antibiotika oder andere kleine Moleküle gibt es oft nicht genügend Bindungsstellen auf dem Molekül. Bei diesem Testformat wird der Analyt auf der Testlinie immobilisiert, und der mit den Nanopartikeln konjugierte Antikörper weist entweder den Analyt in der Probe nach, wenn diese weggespült wird (kein sichtbares Signal = positives Ergebnis), oder er bindet an den Analyt auf der Testlinie (sichtbares Signal = negatives Ergebnis).
Auswahl von Lateral Flow-Publikationen, die Antikörper-online zitieren
- Drugs of Abuse: Quantitative Point-of-Care-Plattform für die Bewertung von Missbrauchsdrogen in Urin, Serum und Vollblut mit ABIN723246 .1
- Pregnancy: Entwicklung eines tragbaren Raman/SERS-LFA-Readers mit ABIN2143148 .2
- Influenza: Nutzung ABIN573415 zur Entwicklung eines Dual Recognition Element Lateral Flow Assay zum multiplexen stammspezifischen Nachweis von Influenzaviren. 3
- Bakterieller Krankheitserreger: Entwicklung eines Point-of-Care-Magnetfokus-Lateral-Flow-Sensors für den Nachweis und die Erstellung von Profilen pathogener Bakterien mit ABIN6391433 .4
- SARS-CoV-2: Papierbasierter Test zum schnellen Vor-Ort-Screening von SARS-CoV-2 in klinischen Proben mit ABIN6990129 .5
- Lyme Krankheit: Entwicklung eines multiplexen Point-of-Care-Immundiagnosetests für den Antikörpernachweis in Humanseren durch vertikales Stapeln von funktionalen Papierschichten unter Verwendung von ABIN964717 .6
Wichtige Ziele bei der Entwicklung von Lateral Flow Assays
Referenzen
- : "Fast, Sensitive, and Quantitative Point-of-Care Platform for the Assessment of Drugs of Abuse in Urine, Serum, and Whole Blood." in: Analytical chemistry, Vol. 89, Issue 16, pp. 8273-8281, (2019) (PubMed).
- : "16S rRNA Monitoring Point-of-Care Magnetic Focus Lateral Flow Sensor." in: ACS omega, Vol. 6, Issue 16, pp. 11095-11102, (2021) (PubMed).
- : "Paper-Based Test for Rapid On-Site Screening of SARS-CoV-2 in Clinical Samples." in: Biosensors, Vol. 11, Issue 12, (2022) (PubMed).
- : "Dual Recognition Element Lateral Flow Assay Toward Multiplex Strain Specific Influenza Virus Detection." in: Analytical chemistry, Vol. 89, Issue 12, pp. 6781-6786, (2019) (PubMed).
- : "Rapid, Quantitative, and Ultrasensitive Point-of-Care Testing: A Portable SERS Reader for Lateral Flow Assays in Clinical Chemistry." in: Angewandte Chemie (International ed. in English), Vol. 58, Issue 2, pp. 442-446, (2020) (PubMed).
- : "Paper-based multiplexed vertical flow assay for point-of-care testing." in: Lab on a chip, Vol. 19, Issue 6, pp. 1027-1034, (2019) (PubMed).
Creative mind of antibodies-online with a keen eye for details. Proficient in the field of life-science with a passion for plant biotechnology and clinical study design. Responsible for illustrated and written content at antibodies-online as well as supervision of the antibodies-online scholarship program.
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