Fluoreszenz Western Blot
Fluoreszierendes Western Blotting kann viele Vorteile bieten und die sehr robuste Western Blotting Technik verbessern. Fluoreszenz-Westernblotting ist eine Methode, die sich immer größerer Beliebtheit erfreut, da sie einen leistungsstarken quantitativen Nachweis der Proteinexpression ermöglicht.
Das Grundprinzip der Methode ist, dass die Stärke der Fluoreszenz eines an einen Detektionsantikörper gebundenen Fluorophors proportional zur Stärke der Proteinexpression ist. Da die Fluoreszenz nicht enzymatisch auftritt, wie es beim klassischen Western Blotting der Fall ist, ist die Quantifizierung wesentlich reproduzierbarer.
Abbildung 1. Fluoreszenz-Westernblotting: 1. Der Fluorophor-konjugierte Sekundärantikörper erkennt den an das interessierende Protein gebundenen Primärantikörper. 2. Eine Lichtquelle wird verwendet, um das fluoreszierende Konjugat zur Fluoreszenz anzuregen. 3. Der angeregte Farbstoff emittiert Licht einer bestimmten Wellenlänge, das durch digitale Bildgebung sichtbar gemacht werden kann. So kann das interessierende Protein quantitativ nachgewiesen werden.
Fluoreszenz vs. Chemilumineszenz Western Blotting
| Chemilumineszenz-Nachweis | Fluoreszenz-Detektion | |
|---|---|---|
| Signalquelle | Signal aus enzymatischer Reaktion | Signal von Fluorophor |
| Detektion | Fotografischer Film, bildgebendes Instrument | Bildgebendes Gerät mit Lichtquelle und Filtern |
| Empfindlichkeit | Gut, große Auswahl an Substraten verfügbar | Gut, große Auswahl an Fluorophoren verfügbar |
| Quantifizierung | Einkanal, schwierige Normalisierung | Mehrkanalig, einfachere Normalisierung |
| Signaldauer | Minuten bis Stunden | Wochen bis Monate |
Blockierpuffer für Fluoreszenz-Westernblotting
- Entwickelt für Western Blotting mit fluorochrom-konjugierten Antikörpern.
- Besteht aus einer proprietären TRIS-gepufferte Kochsalzlösung (pH 7,6 mit Thimerosal).
- Ultra reine Reagenzien aufgelöst in aufbereitetem Wasser.
- Western Blot Blockierungspuffer ideal geeignet für Infrarot Western Blotting.
- Dieses Produkt ist 2-fach konzentriert.
- Durch einen Millipore 0.22 Micron Filter aufgereinigt.
Multiplex Duo Fluoreszenz-Westernblotting-Kits
Multiplex Duo fluoreszierende Western Blotting Kits eignen sich für die gleichzeitige Detektion und Quantifizierung von spezifischen Proteinpopulationen in einer biologischen Probe. Durch die Verwendung einer Kombination von zwei Antikörpern, die für minimale Kreuzreaktivität ausgewählt wurden, ermöglicht die fluoreszierende Detektionsmethode die gleichzeitige quantitative Analyse von mehreren Proteinen innerhalb derselben Probe auf demselben Blot.
Abbildung 2. Multiplex-Duo-Fluoreszenz-Westernblotting-Kits: Gleichzeitige Detektion von α-Tubulin und GFP auf einem einzigen Blot mit markierten sekundären Antikörperkonjugaten. Das Sondieren von Zelllysaten und GFP mit Maus-α-Tubulin- und Huhn-anti-GFP-Antikörpern, gefolgt von 649 Ziege-anti-Maus-IgG (pseudo-grün gefärbt) und 800 Ziege-anti-Huhn-IgG (rot) Konjugaten und anschließendes Imaging mit dem Syngene G:BOX Imaging System ergab vergleichbare Detektionsmuster.
| Name / Produktlink | Fluoreszenz-Kanäle | Reaktivität |
|---|---|---|
| DyLight™ Multiplex 488/800 Duo Western Blot Kit | 488 / 800 nm | Maus, Kaninchen |
| DyLight™ Multiplex 549/800 Duo Western Blot Kit | 549 / 800 nm | Maus, Kaninchen |
| DyLight™ Multiplex 649/488 Duo Western Blot Kit | 649 / 488 nm | Maus, Kaninchen |
| DyLight™ Multiplex 649/549 Duo Western Blot Kit | 649 / 549 nm | Maus, Kaninchen |
| DyLight™ Multiplex 649/800 Duo Western Blot Kit | 649 / 800 nm | Maus, Kaninchen |
Multiplex Trio Fluoreszenz-Westernblot-Kits
Der Multiplex-Trio-Fluoreszenz-Westernblot-Kit eignet sich für die gleichzeitige Detektion und Quantifizierung spezifischer Proteinpopulationen in einer biologischen Probe. Durch die Verwendung einer Kombination von drei Antikörpern, die für minimale Kreuzreaktivität ausgewählt wurden, ermöglicht die fluoreszierende Detektionsmethode die gleichzeitige quantitative Analyse von mehreren Proteinen innerhalb derselben Probe auf demselben Blot.
| Name / Produkt-Link | Fluoreszenz-Kanäle | Reaktivität |
|---|---|---|
| DyLight™ Multiplex 649/488/800 Trio Western Blot Kit | 649 / 488 / 800 nm | Huhn, Maus, Kaninchen |
| DyLight™ Multiplex 649/549/800 Trio Western Blot Kit | 649 / 549 / 800 nm | Huhn, Maus, Kaninchen |
DyLight™ konjugierte Sekundärantikörper
TrueBlot® HRP-konjugierte sekundäre Antikörper
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- Target-Abdeckung: Antikörper, Proteine, Kits und Lysate für eine Vielzahl relevanter Targets
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